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作者
刘珊
单位
医院
前言在日常实验检测中，我们可能会遇到同一个病患，同样的检测项目不同检测标本导致其完全不同的结果。或者同一个检测标本，不同的检测方法学出现不同的检测结果，往往给报告审核增加了难度，那么在这些情况发生时，我们应该怎么样去思考？做些什么？得出怎样的结论？给临床什么样的反馈呢？
案例经过患者女28岁由于停经6+周，阴道流血就诊，于实验室检测血清人绒毛膜促性腺激素（HCG）、孕酮、尿液人绒毛膜促性腺激素等相关检测。工作人员在进行血清人绒毛膜促性腺激素检测（电化学发光法）时习惯对血清用胶体金法进行一次检测，以便判定血清人绒毛膜促性腺激素是否需要稀释测定。实验室结果如下：
尿液HCG金标法血清HCG金标法血清HCG+PROG化学发光法
什么原因造成血HCG阳性而尿HCG又是阴性这种矛盾的结果呢？且同一血液标本方法学不同其检测结果也完全不同呢？
案例分析1.相关概念：
人绒毛膜促性腺激素（HCG）是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，它是由α和β两个亚基组成，含有个氨基酸，相对分子质量是37KD[1-2]。临床检查对早期妊娠、妊娠相关疾病、葡萄胎、滋养细胞肿瘤等有一定重要的价值。
实验室胶体金法检测原理是：胶体金试纸法是把抗β-HCG单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体分别同相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗α-HCG单克隆抗体及其它试剂组成利用层析双抗体夹心法检测HCG。
检测时，当被检尿样虹吸通过胶体金标记抗体时，形成抗原抗体胶体金复合物，复合物继续爬行，通过包被的抗-HCGα亚基Mcab时，形成双抗体夹心胶体金复合物，在包被线处呈现色带，过量的胶体金抗体继续爬行，和羊抗鼠对照线形成胶体金免疫复合物，呈现色带。
化学发光法检测原理是：标本、生物素化的HCG单克隆抗体和钌复合物标记的HCG单克隆抗体一起孵育，形成抗原抗体夹心复合物。
加入链霉素和素包被的磁微粒进行孵育，让上述形成的复合物通过生物素和链霉亲和素间的反应结合到磁微粒上。反应混合液被吸到测量池中，磁微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定，检测结果由一起自动从标准曲线上查出。
2.考虑到患者是在憋尿的情况下留取标本，担心尿液稀释对尿HCG造成假阴性结果，建议患者重新留取标本，同时考虑到在免疫反应中，抗原抗体的发生需遵循一定的量比关系。当抗原或者抗体过量形成的免疫复合物较少，出现带现象时，可导致结果假阴性。于是对标本进行了倍比稀释。结果如下：
稀释倍数
尿液HCG胶体金法
血HCG化学发光法
2倍
阴性
0.5
4倍
阴性
0.5
8倍
阴性
0.5
同时患者重新留取尿液标本胶体金法检测HCG仍然为阴性
3.人绒毛膜促性腺激素（HCG）在人的血液中有多种形式存在：如全分子HCG(又称整分子HCG、规则HCG等)、游离B亚单位、游离亚单位、缺刻HCG、高糖基化HcG(H-HCG)、B亚单位C末端肽缺如HCG等。
它与促黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）及促甲状腺激素（TSH）都是由一个α亚基和β亚基所组成。其α亚基与垂体分泌的FSH、LH、TSH等有相似性，故相互间能发生交叉反应。于是对患者标本进行了LH、FSH、TSH的检测，结果如下图：
4.排除α亚基的交叉感染后，大家已想到异嗜性抗体的干扰。由于HCG完整分子、游离β亚单位分子、HCG的主要代谢产物是β－核心片段，均能够通过肾小球进入尿液。而异嗜性抗体分子太大，不易通过肾小球的滤过屏障而出现再尿液中，故易导致血清HCG阳性而尿液阴性。
若是异嗜性抗体的影响，为什么血清检测胶体金法阳性而化学发光法阴性呢？会不会是方法学的原因呢？
目前市面上各种方法、各种厂商所用的抗体针对的抗原表位不同，对干扰物质的抗干扰能力也不相同。且胶体金法试剂组成成分为中的抗鼠IgＧ多克隆抗体是用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。较单克隆抗体更易发生交叉反应。且有相关研究表明异嗜性抗体在牛、羊、马、豚鼠、鼠和猴免疫球蛋白间存在的交叉反应，鼠抗体表现得特别强烈。
那我们怎么去验证呢？由于实验室检测项目有限，从最常见的类风湿因子和自身免疫抗体做起。结果如下图：
考虑到一些异嗜性抗体也会对患者D-D二聚体造成影响，若标本中异嗜性抗体含量不是很高时，稀释法可以减少其干扰.对患者加做了凝血检查，结果如下图：
对标本进行稀释后结果：
这样的结果再次佐证了标本是由于异嗜性抗体干扰造成的结果假阳性。
同时对血清进行稀释进行胶体金检测，结果如下图：
经过一系列的实验，现在终于可以放心的发出一份报告啦！
结语异嗜性抗体（Heterophilantibody，HA）是由已知的或未知的抗原物质刺激人体产生的一类具有足够滴度、能与多个物种的免疫球蛋白发生相对弱的结合的多重特异性的免疫球蛋白。这种抗体能和原抗原毫无关系的抗原起反应,这种与被检物质化学结构不同但活性相似的物质被称之为异嗜性抗体。
异嗜性抗体可以与许多动物免疫球蛋白的片段结合，干扰实验,使测定结果与临床表现不符，导致错误结果出现。
诱发人体产生异嗜性抗体的因素有很多，常见的有类风湿关节炎、自身免疫疾病、注射疫苗、动物接触、过敏、输血、心肌病变、胃肠炎、血液透析、流行性感冒、免疫抑制药物等。
目前为止还没有一种方法可以彻底消除HA的干扰。我们仅可以依靠稀释标本、超速离心、标本加热、凝胶过滤等物理方法来消除Ig片段降低干扰。或使用不同的测定方法之间存在的差异，减低体内HA的干扰。
目前阻滞剂的生产较有效的降低了异嗜性抗体的干扰，它利用非特异性和特异性阻断剂与HA结合从而达到减少干扰。医院普及使用。
在日常工作中，当我们遇到“变脸”的检验结果时，需要认真分析是什么导致了其变化。尤其是在免疫工作中我们需要对干扰因素进行必要的了解和验证。
影响免疫抗原抗体检测的内源性干扰因素中除异嗜性抗体外还有补体、溶菌酶、细胞因子等，外源性性干扰物质有标本溶血、脂血、贮存时间过长、凝固不全等。
且工作中还需要对所使用试剂的特性，组成成分等进行了解，以确定试剂在哪些情况下可能会出现干扰。同时在出现检验结果与临床不符时，应及时与临床联系和沟通，运用多种技术和方法并结合临床给出最终结果。
[1]PoratS,SavchevS,BdolahY,etal.Earlyserumβ-humanchorionicgonadotropininpregnanciesafterinvitrofertilization:contributionoftreatmentvariablesandpredictionoflong-termpregnancyout
